Detecția mutațiilor în gena N RAS, exonii 2, 3 și 4 (codonii 12, 13, 59, 61, 117 și 146) în cancerul colorectal - 14 mutații (țesut inclus în parafină)

Cancerul colorectal (CRC) reprezinta una dintre cele mai prevalente si preventibile forme de cancer. Aceasta neoplazie afectaeza partea inferioara a tractului digestiv, respectiv colonul si rectul. Din punct de vedere al transmiterii, au fost definite 3 tipuri: familial, ereditar si sporadic. Factorii de risc pentru cancerul colorectal sporadic, forma cea mai intalnita in populatie, sunt reprezentati in principal de dieta, factori de mediu si factori genetici. Dintre factorii genetici amintim mutatiile somatice la nivelul genelor din familia RAS (All RAS), respectiv genele KRAS si NRAS. Acestea se caracterizate printr-o omologie de secventa de ~90%. Mutatiile la nivelul lor au fost identificate in ~52% din carcinoamele colorectale.

Mutatii somatice KRAS au fost identificate in 40% dintre cancerele colorectale, cel mai frecvent la nivelul exonului 2, codonul 12 (70-80%) si 13 (15-20%) si cu o frecventa mai redusa in exonul 3 si 4, codonul 61 (5%), respectiv 146 (5%). Studiile - Distributia mutatiilor asociate cu CRC sporadic - au aratat ca acestea:

• sunt frecvent intalnite la barbati care prezinta adenocarcinom bine sau moderat diferentiat cu stabilitate microsatelitara;
• confera rezistenta la terapia cu anticorpi monoclonali anti-EGFR.

Aceste mutatii punctiforme afecteaza activitatea proteinei KRAS, inducand o stare de activare continua, asociata cu cresterea, proliferarea celulara necontrolata si tumorigeneza. Statusul mutational KRAS prezinta concordanta crescuta intre tumora primara si metastaza, ceea ce sugereaza ca mutatiile KRAS au rol determinant in etapele timpurii ale tumorigenezei cat si in progresia acesteia. In contrast, mutatiile NRAS au fost observate in 2,5 - 4,5% din CRC, mutatiile All RAS fiind asociate cu rezistenta primara la terapia personalizata cu anticorpi monoclonali anti-EGFR (Epidermal Growth Factor Receptor = Receptorul pentru factorul de creştere epidermal care aparţine familiei de receptori tirozin kinazici). Acesti anticorpi reduc riscul de progresie a tumorii şi îmbunătăţesc supravieţuirea globală, perioada de supravieţuire fără progresie a bolii, precum Frecventa mutatiilor KRAS si NRAS şi calitatea vieţii pacienţii cu CRC refractar la tratament. Confrom ghidurilor NCCN (National Comprehensive Cancer Network) testarea RAS trebuie acordata tuturor pacientilor cu CRC metastatic si sa includa exonii 2, 3 si 4 ai genelor KRAS si NRAS (testare RAS extinsa). Doar pacientii care prezinta gena KRAS wild-type (de tip salbatic, normala) sunt eligibili pentru terapia cu anticorpi monoclonali anti-EGFR in combinatie cu chimioterapia de prima linie!

Deoarece nu toti pacientii KRAS wild-type raspund la terapia anti-EGFR, au fost studiati alti biomarkeri de rezistenta care ar putea explica variabilitatea raspunsului clinic. Astfel, s-a observat ca ~20% din CRC prezinta mutatie activatoare in gena BRAF, cea mai fecvent intalnita fiind mutatia V600E care este asociata cu:

• varsta inaintata
• sex feminin
• localizare tumorala
• rezistenta la terapia cu anticorpi monoclonali anti-EGFR.

Testarea

se adreseaza pacientilor - cu diagnostic de - adenocarcinom colorectal - in stadiu avansat de boala chirurgicala sau biopsie - se realizeaza prin metoda Real-Time PCR, conform algoritmului (fig. 3) "in cascada", care cuprinde 3 etape:

1. Screening-ul exonul 2 KRAS - sunt testate 7 mutatii localizate la nivelul codonului 12 si 13; daca este detectata o mutatie testarea se opreste, pacientul nefiind eligibil pentru terapia personalizata. Daca nu este detectata nicio mutatie, se continua testarea cu etapa 2.

2. Testarea extinsa All RAS - sunt testate 28 de mutatii la nivelul exonilor 3 si 4 ai genei KRAS si 2, 3 si 4 ai genei NRAS, cu stoparea analizei in situatia detectarii unei mutatii All RAS sau cu continuarea acesteia cu etapa 3, in caz contrar;

3. Testarea mutatiilor BRAF - permite detectia a 5 mutatii la nivelul codonului 600, inclusiv a mutatiei V600E. Algoritmul testarii mutatiilor somatice in CRC

Bibliografie:

1. Dienstmann R, et al., Overcoming resistance to anti-EGFR therapy in colorectal cancer, American Society of Clinical Oncology, 2015;

2. Inamura K, Colorectal Cancers: An update on their molecular pathology, Cancers, 2018;

3. Sforza V, et al., Mechanisms of resistance to anti-epidermal growth factor receptor inhibitors in metastatic colorectal cancer, World Journal of Gastroenterology, 2016;

4. Saeed O, et al., RAS genes in colorectal carcinoma: pathogenesis, testing guidelines and treatment implications, J Clin Pathol, 2019;

5. Nguyen HT, Doung HQ, The molecular characteristics of colorectal cancer: implications for diagnosis and therapy (review), Oncology Letters, 2018;

6. Clarke C N, Kopetz ES, BRAF mutant colorectal cancer as a distinct subset of colorectal cancer: clinical characteristics, clinical behavior, and response to targeted therapies, J Gastrointest Oncol, 2015.