Detectia mutatiilor in genele ALL RAS, exonii 2, 3 si 4 (codonii 12, 13, 59, 61, 117 si 146) in cancerul colorectal – 35 mutatii (tesut inclus in parafina)

Determinarea statusului RAS reprezintă un biomarker esențial în managementul cancerului colorectal, fiind obligatorie înaintea inițierii tratamentelor anti-EGFR, deoarece prezența mutațiilor RAS este asociată cu lipsa răspunsului la aceste terapii.

Termen de execuție*

10 zile lucrătoare

Despre analiza ALL RAS (KRAS și NRAS) în cancerul colorectal

Genele KRAS și NRAS fac parte din familia RAS și codifică proteine implicate în transmiterea semnalelor de creștere celulară prin calea EGFR-RAS-RAF-MAPK.

Mutațiile activatoare ale genelor RAS determină activarea constitutivă a căilor de proliferare celulară, independent de stimularea receptorului EGFR. În aceste situații, terapiile anti-EGFR devin ineficiente.

Testul analizează cele mai importante mutații din:

KRAS

• exonul 2 (codonii 12 și 13)
• exonul 3 (codonii 59 și 61)
• exonul 4 (codonii 117 și 146)

NRAS

• exonul 2 (codonii 12 și 13)
• exonul 3 (codonii 59 și 61)
• exonul 4 (codonii 117 și 146)

Prin analiza simultană a tuturor acestor regiuni ("ALL RAS"), testul oferă o evaluare completă a statusului molecular recomandat de ghidurile internaționale de oncologie.

Afecțiuni sau indicații clinice asociate

Testul este indicat în:

• cancer colorectal metastatic (mCRC)
• cancer colorectal local avansat în evaluarea terapeutică
• selecția pacienților pentru tratamente anti-EGFR
• evaluarea biomarkerilor predictivi în oncologia de precizie
• profilarea moleculară a tumorilor colorectale
• reevaluarea moleculară în cazuri de progresie sau recidivă

Cui se adresează

• pacienților diagnosticați cu cancer colorectal
• pacienților cu boală metastatică eligibili pentru tratament sistemic
• pacienților pentru care se ia în considerare terapia anti-EGFR
• echipelor multidisciplinare de oncologie (tumor board)
• oncologilor care doresc personalizarea tratamentului pe baza profilului molecular

Metodologie de testare

• extracție ADN din țesut tumoral inclus în parafină (FFPE)
• evaluarea calității și cantității ADN-ului tumoral
• amplificare ADN tumoral și detecție mutații prin Real-Time PCR (RT-PCR)
• interpretarea rezultatelor
• raportarea statusului tumoral molecular:
• RAS Wild Type (mutații nedetectate)
• RAS Mutat (mutație detectată)

Beneficii și importanță clinică

• biomarker predictiv esențial în cancerul colorectal metastatic
• identifică pacienții care pot beneficia de terapii anti-EGFR
• evită administrarea unor tratamente ineficiente și costisitoare
• contribuie la personalizarea tratamentului oncologic
• permite alegerea optimă a liniilor terapeutice
• susține deciziile multidisciplinare de tratament
• recomandat de ghidurile ESMO, NCCN și ASCO pentru managementul cancerului colorectal metastatic

Impact terapeutic

Pacienți cu status RAS Wild Type

Pacienții fără mutații detectate în genele KRAS și NRAS pot fi eligibili pentru terapii cu anticorpi monoclonali anti-EGFR, precum:

• Cetuximab
• Panitumumab

Aceste terapii sunt utilizate în combinație cu regimuri standard de chimioterapie și pot îmbunătăți răspunsul terapeutic și supraviețuirea la anumite categorii de pacienți.

Pacienți cu status RAS Mutat

Prezența mutațiilor KRAS sau NRAS este asociată cu:

• lipsa beneficiului clinic semnificativ al terapiilor anti-EGFR
• orientarea către alte strategii terapeutice
• selecția altor terapii țintite sau regimuri de chimioterapie

În anumite situații, identificarea unor mutații specifice (ex. KRAS G12C) poate deschide accesul la terapii țintite dedicate (terapia cu inhibitori KRAS G12C).

Particularități

Testarea se realizează prin metoda real-time PCR, o tehnică relativ simplă, care prezinta urmatoarele caracteristici:

      - mai puțin costisitoare si cu un timp de analiza mai redus, comparativ cu tehnica NGS;

      - sensibilitate crescuta - permite amplificarea chiar si a unor cantitati reduse de ADN, ceea ce este crucial pentru analiza ADN, adesea limitat, extras din țesut inclus in parafina

     - specificitate crescuta pentru mutațiile analizate - permite detectia mutatiilor prezente într-o frecventa redusa in proba tumorala;

     - robustețe - permite testarea chiar si atunci cand calitatea ADN genomic tumoral este suboptima, oferind rezultate fiabile pentru probele FFPE, unde predominante sunt fragmentele scurte de ADN;

    - limita de detecție scazută - permite detectia de variante cu frecvente alelice scazute (1% ADN mutant intr-un background de 99% ADN normal), chiar si in biopsii cu continut tumoral scazut.

Limitări:

• Acest test se referă doar la mutatiile ALL RAS. Metoda utilizata nu detectează toate variantele rare ale genelor KRAS și NRAS. Datorită diversitatii mutatiilor, caracterizarea completa a genomului tumoral este importanta pentru identificarea tipului specific de mutatie si ghidarea deciziei terapeutice;
• Probele de calitate redusa(material tisular insuficient,procent tumoral<2%,concentratie ADN < 1 ng, ADN degradat/denaturat ca urmare a proceselor de includere in parafina) pot prezenta date de calitate inferioara,impropii  generării unui rezultat corect
• Probele cu rezulatat negativ (Mutații nedetectate) pot prezenta mutații care nu sunt incluse in acest kit;

Tip probă și condiții de recoltare

Probă necesară:

• țesut tumoral inclus în parafină (FFPE)
• bloc de parafină sau lame histologice necolorate

Condiții de recoltare:

• probă cu procent tumoral adecvat pentru analiza moleculară
• fixare corespunzătoare (formol 10%)
• transmiterea raportului histopatologic împreună cu proba
• transport conform protocolului laboratorului

Analize asociate recomandate

• Mutația BRAF V600E – valoare prognostică și terapeutică
• Instabilitate microsatelitară (MSI) / dMMR – eligibilitate pentru imunoterapie
• HER2 în cancer colorectal – identificarea pacienților eligibili pentru terapii anti-HER2
• PIK3CA – biomarker molecular complementar
• Panel NGS tumori solide – profilare moleculară extinsă
• BRCA1/BRCA2 somatic – în cazuri selectate de profilare oncologică extinsă

Particularitate clinică importantă

Conform ghidurilor internaționale actuale, testarea completă ALL RAS (KRAS + NRAS) trebuie efectuată înaintea inițierii tratamentului cu anticorpi monoclonali anti-EGFR la pacienții cu cancer colorectal metastatic. Evaluarea exclusivă a exonului 2 KRAS nu mai este considerată suficientă, fiind necesară analiza tuturor mutațiilor relevante din exonii 2, 3 și 4 ai genelor KRAS și NRAS pentru o selecție terapeutică optimă.