Hemofilia A – secventierea genei F8 (include secventiere Sanger pentru regiunea cu omologie inalta)

Testul analizează gena F8, responsabilă de sinteza factorului VIII al coagulării, o proteină esențială în cascada hemostazei.

Mutațiile genei F8 reprezintă cauza principală a hemofiliei A, o boală genetică X-linkată caracterizată prin deficit de factor VIII și sângerări spontane sau post-traumatice.

Secvențierea Sanger permite identificarea variantelor punctiforme (missense, nonsense), inserțiilor și delețiilor mici la nivelul regiunilor codante și intron–exon ale genei F8. În plus, analiza include evaluarea specifică a regiunilor cu omologie înaltă, implicate în mecanismul frecvent de inversiune intronică (în special inversiunea intron 22), asociată formelor severe de hemofilie A.

Afecțiuni sau simptome asociate:

• Hemofilie A congenitală;
• Sângerări spontane (hemartroze, hematoame musculare);
• Sângerări prelungite post-traumatice sau post-chirurgicale;
• Echimoze frecvente;
• Hemoragii severe în formele moderate și severe;
• Complicații articulare cronice (artropatie hemofilică).

Cui se adresează:

Medicilor hematologi, geneticienilor, pediatrilor și specialiștilor implicați în diagnosticul pacienților cu suspiciune de hemofilie A sau cu istoric familial de tulburări de coagulare.

Metodologie de testare:

Analiza este realizată prin secvențiere Sanger a ADN-ului genomic extras din sânge periferic.

Sunt analizate regiunile codante și joncțiunile exon–intron ale genei F8, cu atenție specială asupra regiunilor cu omologie înaltă implicate în mecanismul de inversiune (intron 22 și, unde este relevant, intron 1).

Metoda permite detectarea mutațiilor punctiforme și a variantelor mici, însă poate necesita corelare cu testarea MLPA sau metode complementare pentru rearanjamente structurale mari.

Beneficii și importanță clinică:

• Confirmă diagnosticul molecular al hemofiliei A;
• Identifică mutațiile punctiforme responsabile de deficitul de factor VIII;
• Permite caracterizarea genetică precisă a pacienților și a familiilor;
• Sprijină consilierea genetică și evaluarea riscului de transmitere;
• Contribuie la decizii terapeutice și management personalizat.

Particularități și limitări:

• Nu detectează în mod fiabil deleții/duplicații mari (necesită MLPA);
• Detectarea inversiunii intron 22 poate necesita metode dedicate suplimentare;
• Nu acoperă complet toate rearanjamentele structurale complexe ale genei F8;
• Interpretarea variantelor rare necesită corelare clinică și hematologică.

Tip probă:

Sânge periferic (EDTA) – 2 × 6 ml.

Recoltare:

Proba se recoltează în vacutainer cu EDTA.

Condiții:

Transport conform protocolului laboratorului

Denumiri alternative:

Secvențiere gena F8; Test genetic hemofilie A; Analiză Sanger F8; Diagnostic molecular hemofilie A; Test inversiune intron 22 F8.

Analize asociate recomandate:

• MLPA gena F8 (deleții/duplicații);
• Activitatea factorului VIII plasmatic;
• Teste de coagulare (APTT, PT);
• Testare genetică familială (carrier screening);
• Consiliere genetică specializată;
• Analiza genei F9 (pentru diferențiere hemofilie B, dacă este cazul).