Analiza genei CFTR prin tehnica MLPA (Multiplex Ligation-dependent Probe Amplification) este un test genetic utilizat pentru detectarea delețiilor și duplicațiilor la nivelul genei CFTR, implicate în apariția fibrozei chistice (mucoviscidoza) și a spectrului de boli CFTR-related.
*Termenul de execuție reprezintă numărul maxim de zile lucrătoare în care va fi eliberat rezultatul. Acest termen are rol informativ și va fi confirmat în punctul de recoltare.
Testul completează secvențierea NGS a genei CFTR, având rol esențial în identificarea variantelor structurale mari care nu pot fi detectate prin metodele standard de secvențiere.
Termen de execuție*
45 zile lucrătoare
Despre analiza CFTR – MLPA (deleții/duplicații)
Gena CFTR (7q31.2) este responsabilă de codificarea canalului de clor implicat în transportul ionic la nivelul epiteliilor respirator, pancreatic, intestinal și sudoral.
Pe lângă mutațiile punctiforme, o proporție semnificativă de cazuri de fibroză chistică sau fenotip CFTR-related este determinată de:
deleții ale unuia sau mai multor exoni
duplicații ale unor regiuni ale genei CFTR
rearanjamente genomice complexe
Metoda MLPA permite evaluarea cantitativă a fiecărui exon al genei CFTR, identificând variații ale numărului de copii (CNV – Copy Number Variations).
Această tehnică este complementară secvențierii NGS și crește semnificativ rata de detecție a variantelor patogene.
Afecțiuni sau simptome asociate
Testul este indicat în:
fibroză chistică (mucoviscidoză)
forme atipice de CFTR-related disorder
bronșiectazii difuze de cauză genetică
insuficiență pancreatică exocrină
infecții respiratorii recurente
pancreatită cronică idiopatică
infertilitate masculină obstructivă (CBAVD)
screening genetic familial CFTR
cazuri cu suspiciune clinică dar NGS negativ sau incomplet
Cui se adresează
pacienților cu suspiciune de fibroză chistică
pacienților cu fenotip CFTR-related și testare NGS negativă
copiilor cu infecții respiratorii recurente și malnutriție
adulților cu bronșiectazii idiopatice
bărbaților cu azoospermie obstructivă
cuplurilor aflate în evaluare genetică preconcepțională
rudelor pacienților diagnosticați cu mutații ale genei CFTR
cazurilor cu suspiciune genetică neconfirmată prin secvențiere
Metodologie de testare
extracție ADN genomic din sânge periferic EDTA
amplificare multiplex a regiunilor țintă ale genei CFTR
ligare specifică a sondelor MLPA
amplificare și cuantificare fragmentară
analiză comparativă a intensității semnalului pentru fiecare exon
detectarea:
delețiilor heterozigote sau homozigote
duplicațiilor exonice sau multi-exonice
interpretare conform ghidurilor genetice internaționale
Beneficii și importanță clinică
detectează deleții/duplicații CFTR nedetectabile prin NGS
crește acuratețea diagnosticului de fibroză chistică
completează analiza mutațiilor punctiforme ale genei CFTR
permite identificarea cazurilor cu fenotip atipic CFTR-related
sprijină consilierea genetică familială și reproductivă
contribuie la un diagnostic complet în cazuri complexe
optimizează strategia de testare genetică secvențială
Particularități și limitări
nu detectează mutații punctiforme sau mici inserții/deleții
trebuie utilizat complementar cu secvențierea NGS a CFTR
pot exista variații tehnice legate de calitatea ADN-ului
unele rearanjamente foarte complexe pot necesita metode suplimentare
interpretarea necesită corelare cu fenotipul clinic și testul sudorii
rezultatele trebuie integrate într-un algoritm diagnostic complet CFTR
Tip probă și condiții de recoltare
Probă necesară:
sânge integral EDTA
Volum recomandat:
2 × 6 ml sânge periferic
Condiții de recoltare:
recoltare venoasă standard
nu necesită condiții speciale de pregătire
transport conform protocolului laboratorului
ADN stabil pentru analiză MLPA în condiții standard de transport
Analize asociate recomandate
Secvențiere NGS a genei CFTR – identificarea mutațiilor punctiforme
Testul sudorii (clor în transpirație) – confirmare funcțională
Panel NGS boli respiratorii genetice
Elastază pancreatică fecală
Testare genetică familială CFTR
Carrier screening preconcepțional pentru cupluri
Particularitate clinică importantă
În fibroza chistică, o proporție relevantă de pacienți prezintă deleții sau duplicații exonice ale genei CFTR, care nu sunt detectabile prin secvențiere standard NGS. Din acest motiv, MLPA este esențial ca test complementar, fiind recomandat în special în cazurile cu suspiciune clinică puternică și rezultat NGS negativ sau incomplet, pentru a asigura un diagnostic genetic complet și corect.